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紫外可见分光光度计定量、定性分析需注意的问题

发布时间:2018-03-21      点击次数:1866
       使用紫外可见分光光度计进行定量和定性分析需注意以下一些问题: 

  吸光度读数范围:吸光度测量误差在透过率过大或过小时都会变大,为了满足定量分析的误差要求<5%),在定量分析时要求吸光度应在一定的范围内这个范围的具体值与仪器性能有关,主要是与紫外可见分光光度计检测系统噪声大小有关,但通常都在0.1~1.0范围内,如果仪器的档次更低,则范围更窄。根据朗伯比尔定律,影响吸光度大小的因素主要是样品摩尔吸光系数,浓度和比色皿光程。实验中吸光度过大的样品可通过稀释样品使吸光度到所需范围内。如果样品不能稀释,可以改用光程较小的比色皿减小吸光度。吸光度过小的样品可使用光程较大的比色皿以增大吸光度。

  吸收波长的选择:进行单波长测量时,需要考虑朗伯比尔定律对入射光单色性的要求和测定灵敏度的要求。没有干扰时,一般选择在吸收峰的zui大吸收波长位置处,如果有干扰,选择在没有干扰且吸光度变化较平缓的位置。 进行多波长校正时,除尽量满足单波长测定的波长要求外,还要求多个组分间的吸收光谱间线性无关。 

  狭缝的选择:狭缝的大小会影响到仪器的信噪比和标准曲线的线性范围。狭缝过大,通常会使线性范围变小,特别是当不在zui大吸收波长位置测定时更是如此。狭缝过小,信噪比变差,基线平直度和测量数据的重复性会变差。此外,还需要考虑样品吸收峰宽度的影响。通常单波长测定时,一般选择在zui大吸收波长位置,线性范围容易满足,可选择较宽的狭缝(1~2nm)多波长测定时,很难同时在所有波长都满足线性范围要求,应选择较小的狭缝。 

  重复测定次数和波长扫描速度:对吸光度不是很大的样品,或者狭缝不是很小,这是检测器检测的光信号的强度是比较大的,重复性较好,可选择较少的重复次数。相反,如果样品吸光度很大,狭缝很小,选择较大的重复次数可获得更好的结果。 

  测定波长间隔:在扫描光谱时需要选择,可根据样品吸收峰的宽度进行选择,峰宽较大时,可选择较大的波长间隔。反之亦反。通常每个正常的吸收峰应该用不少于30个数据点表示出来。

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