如何正确校准超微量分光光度计

　　超微量分光光度计的校准是确保其测量准确性和可靠性的核心环节，涉及多类方法与复杂流程。以下从校准方式分类、技术原理、操作流程及实践建议四方面展开阐述：

　　一、仪器自校准功能

　　超微量分光光度计通常内置自校准程序，通过仪器自带的标准参数(如暗电流校正、光源强度补偿)对光学系统进行初始化标定。自校准可快速修正电子漂移、光源老化等引起的偏差，是日常维护的基础步骤。操作时需进入仪器菜单，选择“自校准”或“性能验证”模式，按提示执行空白测量(如空气或纯水作为参比)，仪器会自动调整至出厂预设参数并生成校准报告。但需注意，自校准无法纠正波长偏移或光路物理变化(如光纤位移)，需结合其他方法定期验证。

　　二、外部标准溶液校准

　　当仪器用于定量分析(如核酸、蛋白浓度测定)时，需通过标准溶液验证吸光度准确性。常用标准物质包括霍姆斯缓冲液(HRP，用于紫外区校准)和NIST追溯标准溶液(如重铬酸钾溶液，用于多波长交叉验证)。操作时需用移液枪精确滴加0.3-2μL标准液，形成稳定液柱(光程0.05-0.5mm)，并在目标波长下测量不同浓度标准品，绘制标准曲线，计算仪器线性相关系数(R²>0.995为合格)。同时，需使用同批次溶剂(如超纯水)作为参比，避免溶剂杂质干扰。

　　三、波长准确性校验

　　波长准确性直接影响定性分析(如特征吸收峰识别)。由于氙灯光源或LED光源可能发生波长漂移，需定期校验。具体方法包括汞灯特征谱线法(利用汞灯在253.6nm、296.7nm等处的尖锐吸收峰，对比仪器显示波长与实际峰值偏差，应<±1nm)、Horia溶液法(通过钬玻璃在可见光区的多条特征吸收峰进行多点校准)以及软件校准(部分机型支持自动扫描标准滤光片，通过算法修正波长偏移)。

　　四、稳定性与重复性检测

　　短期稳定性检测可通过连续测量同一标准样品(如1mg/mL BSA溶液)至少6次，记录吸光度值(如280nm下误差应<±0.005OD)，并检查基线噪声(通常要求<0.002OD)以评估光路稳定性。长期稳定性检测则需每月进行一次全波长范围(200-1000nm)的基线扫描，观察杂散光和波长重复性，并使用标准溶液周期性验证(如每周一次)，记录偏差趋势。

　　超微量分光光度计的校准是一个综合性的过程，需要操作人员具备丰富的专业知识和实践经验。通过严格按照校准流程进行操作，并注意每一个细节问题，可以确保仪器的准确性和可靠性，从而为科研和生产提供有力的技术支持。